ব্লগ সম্বন্ধে রিয়েল টাইম পিসিআর জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণের জন্য সোনার মান হিসাবে রয়ে গেছে

যদি প্রচলিত পিসিআর আণবিক জীববিজ্ঞানের "উচ্চীকরণ গ্লাস" হিসাবে কাজ করে, তবে রিয়েল-টাইম পরিমাণগত পিসিআর (কিউপিসিআর) একটি যথার্থ "মাইক্রোস্কোপ" হিসাবে কাজ করে।" এই উন্নত প্রযুক্তি শুধুমাত্র লক্ষ্য জিনের ক্রমবর্ধমান নয় কিন্তু বাস্তব সময়ে বর্ধন প্রক্রিয়া ট্র্যাক, যা জিনের অভিব্যক্তির মাত্রা সঠিকভাবে পরিমাপ করতে সক্ষম করে।এন্ডপয়েন্ট পিসিআরের মোটামুটি অনুমান থেকে রিয়েল-টাইম পিসিআরের নির্ভুলতা এবং দক্ষতার দিকে রূপান্তর আধুনিক আণবিক জীববিজ্ঞানের গবেষণায় একটি অনিবার্য বিবর্তনকে উপস্থাপন করে.

পলিমারেজ চেইন রেঅ্যাকশন (পিসিআর), আণবিক জীববিজ্ঞানের একটি বিপ্লবী কৌশল, ধারাবাহিক-নির্দিষ্ট অলিগনুক্লিওটাইড প্রাইমার, তাপ-প্রতিরোধী ডিএনএ পলিমারেজ,এবং নির্দিষ্ট ডিএনএ বা সিডিএনএ সিকোয়েন্সকে এক্সপোনেন্সিয়ালি প্রতিলিপি করার জন্য সুনির্দিষ্ট তাপীয় চক্র, যা এক মিলিয়ন বারেরও বেশি প্রসারিত করে। Traditional endpoint PCR requires post-reaction detection and quantification through gel electrophoresis and image analysis—a time-consuming process with limited precision that struggles to meet growing demands for quantitative analysis.

রিয়েল-টাইম কিউপিসিআর প্রতিটি পিসিআর চক্রের সময় পণ্য উৎপাদনের পর্যবেক্ষণ করে এই দৃশ্যকে রূপান্তরিত করেছে।গবেষকরা ব্যতিক্রমী নির্ভুলতার সাথে প্রাথমিক লক্ষ্য ক্রম পরিমাণ নির্ধারণ করতে পারেনযদিও পিসিআর তত্ত্বগতভাবে প্রতি চক্রের লক্ষ্যমাত্রা অণু দ্বিগুণ করে, তবে চক্র গণনা এবং শেষ পয়েন্ট পণ্য পরিমাপের মাধ্যমে প্রাথমিক উপাদানগুলি পরিমাপ করার প্রাথমিক প্রচেষ্টাগুলি নির্ভরযোগ্য ছিল না।রিয়েল-টাইম কিউপিসিআর শক্তিশালী পরিমাণগত চাহিদা মেটাতে আবির্ভূত হয়েছে, যখন এন্ডপয়েন্ট পিসিআর মূলত নির্দিষ্ট ডিএনএ ফ্রেগমেন্টগুলিকে সিকোয়েন্সিং, ক্লোনিং এবং অন্যান্য আণবিক জীববিজ্ঞানের অ্যাপ্লিকেশনগুলির জন্য প্রসারিত করার জন্য কার্যকর থাকে।

এই প্রযুক্তিটি প্রতিটি চক্রের পরে ডিএনএ সামগ্রী পরিমাপ করে ফ্লুরোসেন্ট ডাই ব্যবহার করে যা পিসিআর পণ্যগুলির সাথে আবদ্ধ হয় (অ্যাম্প্লিকন) । ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা সরাসরি অ্যাম্প্লিকন পরিমাণের সাথে সম্পর্কিত,সিগন্যাল পরিবর্তন পর্যবেক্ষণের মাধ্যমে প্রাথমিক টেমপ্লেট পরিমাণের পরিমাণ নির্ধারণের অনুমতিসাধারণ ফ্লুরোসেন্ট রিপোর্টারগুলির মধ্যে রয়েছেঃ

• ডাবল-স্ট্র্যান্ডড ডিএনএ (ডিএসডিএনএ) বাঁধনকারী রং
• পিসিআর প্রাইমার বা হাইব্রিডাইজেশন প্রোবগুলিতে সংযুক্ত রঙ্গক অণু

বিশেষায়িত যন্ত্রপাতিগুলি তাপীয় চক্রকে ফ্লুরোসেন্স স্ক্যানিংয়ের সাথে একত্রিত করে বর্ধন কার্ভগুলি তৈরি করে (চিত্র 1) যা চক্রের সংখ্যাগুলির সাথে ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা গ্রাফ করে,পিসিআর প্রক্রিয়া জুড়ে পণ্যের জমে থাকা প্রতিনিধিত্ব করে.

• রিয়েল-টাইম মনিটরিং
• প্রতি চক্রের জন্য সঠিক অ্যাম্প্লিকন পরিমাণ
• বৃহত্তর গতিশীল সনাক্তকরণ পরিসীমা
• বন্ধ টিউব সিস্টেম পিসিআর-পরবর্তী হ্যান্ডলিং দূর করে

এই প্রযুক্তিটি ডিএনএ/আরএনএ সনাক্তকরণ এবং পরিমাণের জন্য সোনার মান হয়ে উঠেছে, যা গতিশীল পরিসরের সাথে দ্বিগুণ নির্ভুলতা অর্জন করে যা আকারের 6-8 অর্ডার জুড়ে।

একটি স্ট্যান্ডার্ড রিয়েল-টাইম পিসিআর প্রোটোকল ৪০ টি চক্র চালায়, প্রতিটিতে রয়েছেঃ

উচ্চ তাপমাত্রা ইনকিউবেশন (সাধারণত 95 °C) দ্বৈত-স্ট্র্যান্ডযুক্ত ডিএনএকে একক স্ট্র্যান্ডে গলে দেয় যখন গৌণ কাঠামোকে ব্যাহত করে। জিসি সমৃদ্ধ টেম্পলেটগুলির জন্য দীর্ঘতর denaturation সময় প্রয়োজন হতে পারে।

পরিপূরক ক্রমগুলি প্রাইমারের গলনের তাপমাত্রার (টিএম) 5 ডিগ্রি সেলসিয়াসের নিচে তাপমাত্রায় হাইব্রিডাইজ করে।

ডিএনএ পলিমেরেজ 70-72 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সর্বোত্তমভাবে কাজ করে, 100 বেস / সেকেন্ড পর্যন্ত হারে প্রাইমার প্রসারিত করে। ছোট অ্যাম্প্লিকনগুলির জন্য, এই পদক্ষেপটি প্রায়শই 60 ডিগ্রি সেলসিয়াসে অ্যানিলিংয়ের সাথে একত্রিত হয়।

এই পদ্ধতিতে প্রথম বিপরীতভাবে আরএনএকে সিডিএনএতে র্যান্ডম, অলিগো ((ডিটি) বা জিন-নির্দিষ্ট প্রাইমারগুলির সাথে বিপরীত ট্রান্সক্রিপটেজ (আরটি) ব্যবহার করে প্রতিলিপি করা হয়।প্রায় ১০% সিডিএনএ রিয়েল-টাইম পিসিআরের জন্য পৃথক টিউবগুলিতে স্থানান্তরিত হয়উপকারিতা হল:

• RT এবং PCR ধাপের স্বাধীন অপ্টিমাইজেশান
• একক সিডিএনএ থেকে একাধিক জিন বিশ্লেষণ করার ক্ষমতা
• কম উপস্থিতির ট্রান্সক্রিপ্টের জন্য উচ্চ সংবেদনশীলতা

একক টিউবে সিডিএনএ সংশ্লেষণ এবং পিসিআর একত্রিত করা দূষণের ঝুঁকি এবং হ্যান্ডলিং ত্রুটি হ্রাস করে।এটি উচ্চ-থ্রুপুট অ্যাপ্লিকেশনের জন্য আদর্শ করে তোলে.

রিয়েল-টাইম পিসিআর নিম্নলিখিত ক্ষেত্রে গুরুত্বপূর্ণ কাজ করেঃ

• জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণঃটিস্যু, কোষ বা পরীক্ষামূলক অবস্থার মধ্যে ট্রান্সক্রিপ্টের মাত্রা তুলনা করা
• প্যাথোজেন সনাক্তকরণঃভাইরাল, ব্যাকটেরিয়া এবং ছত্রাক সংক্রমণ দ্রুত সনাক্তকরণ
• ওষুধের উন্নয়ন:স্ক্রিনিং যৌগ এবং ফার্মাকোলজিক্যাল প্রভাব মূল্যায়ন
• ক্লিনিকাল ডায়াগনস্টিকঃক্যান্সার চিহ্নিতকারী, জেনেটিক ব্যাধি এবং সংক্রামক রোগ সনাক্তকরণ

ডিজিটাল পিসিআর এবং উচ্চ-রেজোলিউশনের গলিত বিশ্লেষণের মতো নতুন প্রযুক্তি রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাপ্লিকেশনগুলি প্রসারিত করার প্রতিশ্রুতি দেয়। পরবর্তী প্রজন্মের যন্ত্রগুলি উন্নত সংবেদনশীলতা, গতি,এবং তথ্য বিশ্লেষণ ক্ষমতাভবিষ্যতে অ্যাপ্লিকেশনগুলির মধ্যে ব্যক্তিগতকৃত মেডিসিন, পরিবেশগত পর্যবেক্ষণ,এবং খাদ্য নিরাপত্তা পরীক্ষার জন্য বাস্তব সময়ে পিসিআরকে বৈজ্ঞানিক অগ্রগতি এবং জনস্বাস্থ্যের জন্য অপরিহার্য হাতিয়ার হিসাবে স্থাপন করা.