ব্লগ সম্বন্ধে বিজ্ঞানীরা জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণের জন্য কিউপিসিআর কৌশল উন্নত করেছেন

কল্পনা করুন যে আপনি একটি কী ধরে আছেন যা কোষের মধ্যে জেনেটিক এক্সপ্রেশন পরিবর্তনগুলি সঠিকভাবে ট্র্যাক করে ⇒ রিয়েল-টাইম কুইন্টিটিভ পিসিআর (কিউপিসিআর) সেই অসাধারণ সরঞ্জাম।এই উন্নত আণবিক কৌশল শুধুমাত্র নির্দিষ্ট ডিএনএ ক্রম সনাক্ত করে না বরং তাদের পরিমাণ সঠিকভাবে পরিমাপ করে, জেনেটিক গবেষণা এবং নির্ণয়ের ক্ষেত্রে বিপ্লব ঘটায়।

ঐতিহ্যগত পিসিআর-এর বিপরীতে, যা প্রসারণের পর ফলাফল বিশ্লেষণ করে, কিউপিসিআর ফ্লুরোসেন্ট সংকেতগুলির মাধ্যমে রিয়েল-টাইমে ডিএনএ প্রতিলিপি পর্যবেক্ষণ করে।এই পার্থক্যটি qPCR-কে একটি শক্তিশালী সরঞ্জাম করে তোলে যা গতিশীল বিশ্লেষণের জন্য.

বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন পিসিআর (আরটি-পিসিআর) একটি ভিন্ন উদ্দেশ্যে কাজ করে, প্রথমে এগুলিকে সিডিএনএতে রূপান্তর করে আরএনএ লক্ষ্যবস্তুগুলিকে প্রশস্ত করে।qPCR রিয়েল টাইম কোয়ান্টিফিকেশনে বিশেষজ্ঞ.

SYBR সবুজ পদ্ধতি ঐতিহ্যগত পিসিআর এর তিন-পর্যায়ের চক্রকে প্রতিফলিত করে কিন্তু একটি ফ্লুরোসেন্ট রং অন্তর্ভুক্ত করে যা সমস্ত ডাবল-স্ট্র্যান্ড ডিএনএকে আবদ্ধ করে।এই রঙ্গকটি ডিএনএ ঘনত্বের অনুপাতে পরিমাপযোগ্য ফ্লুরোসেন্স নির্গত করে.

যদিও SYBR গ্রিনের স্পেসিফিসিটির অভাব ব্যয়বহুল, তবে প্রাইমার ডাইমারের মতো অ-নির্দিষ্ট পণ্য থেকে লক্ষ্যবস্তু পরিবর্ধনকে আলাদা করার জন্য গলনের বক্ররেখা বিশ্লেষণের প্রয়োজন।

টাকম্যান সিস্টেমটি ফ্লুরোসেন্ট রিপোর্টার এবং দমনকারীগুলির সাথে অলিগনুক্লিওটাইড প্রোবগুলি ব্যবহার করে।এই প্রোবগুলি নির্দিষ্টভাবে লক্ষ্য সিকোয়েন্সগুলিকে আবদ্ধ করে এবং এক্সটেনশন চলাকালীন টাক পলিমেরাসের 5'-3' এক্সনুক্লিয়াস ক্রিয়াকলাপ দ্বারা বিভক্ত হওয়ার সময় ফ্লুরোসেন্স মুক্তি দেয়.

যদিও আরো ব্যয়বহুল, TaqMan গুরুত্বপূর্ণ সুবিধা প্রদান করেঃ

• উন্নত স্পেসিফিসিটিঃপ্রোব শুধুমাত্র লক্ষ্য ক্রম আবদ্ধ, মিথ্যা সংকেত নির্মূল
• মাল্টিপ্লেক্স ক্ষমতাঃবিভিন্ন লেবেলযুক্ত প্রোব ব্যবহার করে একাধিক লক্ষ্যমাত্রার একযোগে সনাক্তকরণ

qPCR ফলাফলগুলি সাধারণত তাপীয় চক্রের বিরুদ্ধে ফ্লুরোসেন্সকে প্লট করা অ্যাম্প্লিফিকেশন কার্ভ হিসাবে প্রদর্শিত হয়।থ্রেশহোল্ড চক্র (সিটি) ✓ যখন ফ্লুরোসেন্স ব্যাকগ্রাউন্ড ✓ অতিক্রম করে তখন প্রাথমিক ডিএনএ ঘনত্ব নির্দেশ করে, কম Ct মান উচ্চতর শুরু পরিমাণ প্রতিফলিত।

এমআইকিউই (মিনিমাম ইনফরমেশন ফর কুইন্টেটিভ রিয়েল-টাইম পিসিআর এক্সপেরিমেন্টস) নির্দেশিকাগুলির মাধ্যমে মানসম্মতকরণের প্রচেষ্টা ব্যাপক প্রোটোকল প্রতিবেদন বাধ্যতামূলক করে পরীক্ষামূলক পুনরুত্পাদনযোগ্যতা নিশ্চিত করে।

তথ্যের ব্যাখ্যা করার আগে, qPCR পরীক্ষায় নিম্নলিখিতগুলির বৈধতা প্রয়োজনঃ

1. প্রতিক্রিয়া দক্ষতাঃআদর্শভাবে 90-110%, স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা ঢাল বিশ্লেষণ দ্বারা গণনা করা
2. বিশেষত্বঃএকক পরিবর্ধন শিখর সনাক্তকরণের জন্য গলন বক্ররেখা বিশ্লেষণের মাধ্যমে নিশ্চিত

ভাইরাল লোড টেস্টিংয়ের মতো অ্যাপ্লিকেশনগুলির জন্য পরিচিত ঘনত্বের একটি স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখার সাথে নমুনার সিটি মানগুলির তুলনা করে সঠিক লক্ষ্য কপি সংখ্যা নির্ধারণ করে।

রেফারেন্স জিন ব্যবহার করে নমুনাগুলির মধ্যে জিনের অভিব্যক্তি তুলনা করে। ΔΔCt পদ্ধতি (৯৫-১০৫% দক্ষতা প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য) বা Pfaffl পদ্ধতি (পরিবর্তনীয় দক্ষতার জন্য) অভিব্যক্তি ভাঁজ পরিবর্তনগুলি গণনা করে।

এই পদ্ধতিগুলি গবেষকদের জেনেটিক বৈচিত্র্যগুলি সঠিকভাবে পরিমাপ করতে সক্ষম করে, ক্যান্সার গবেষণা থেকে সংক্রামক রোগ পর্যবেক্ষণ পর্যন্ত ক্ষেত্রগুলিকে এগিয়ে নিয়ে যায়।