এন্টেরোহেমোরাজিক এস্কেরিচিয়া কোলির জন্য খাদ্য নিরাপত্তা দ্রুত পরীক্ষা কিট EHEC ফ্রিজ-শুষ্ক রিয়েল-টাইম পিসিআর রিএজেন্টের সাথে সনাক্তকরণ কোনও কোল্ড চেইনের প্রয়োজন নেই

১। বর্ণনা

এন্টেরোহেমোরেজিক এসচেরিচিয়া কোলাই (EHEC) হল একদল ই. কোলাই স্ট্রেন যা মানুষের মধ্যে হেমোরেজিক ডায়রিয়া এবং এন্টারাইটিস সৃষ্টি করতে সক্ষম, যার মধ্যে O157:H7 সেরোটাইপ সবচেয়ে প্রতিনিধিত্বমূলক স্ট্রেন। খাদ্যবাহিত সংক্রমণের ক্ষেত্রে, দূষণের উৎসগুলির মধ্যে রয়েছে গরুর মাংস, কাঁচা দুধ, হাঁস-মুরগি এবং এর পণ্য, সেইসাথে ফল ও সবজি, যার মধ্যে গরুর মাংস প্রধান সংক্রমণ মাধ্যম।

এই পণ্যটি একটি ফ্রিজ-শুকনো রিয়েল-টাইম পিসিআর রিএজেন্ট জন্য শনাক্তকরণ এসচেরিচিয়া কোলাই টি এটি অত্যন্ত সংরক্ষিত rfbE জিন ব্যবহার করে এসচেরিচিয়া কোলাই  শনাক্তকরণের লক্ষ্য হিসাবে। এটি একটি মাস্টারমিক্স যা টেমপ্লেট ডিএনএ বাদে প্রয়োজনীয় সমস্ত উপাদান ধারণ করে এবং সহজে ব্যবহারের জন্য পিসিআর টিউবে একক-পরীক্ষা হিসাবে প্রি-ডিসপেন্স করা হয়। এই পণ্যের পরিবহন এবং সংরক্ষণের জন্য কোল্ড চেইনের প্রয়োজন হয় না, যা শিপিং খরচ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করে এবং রিএজেন্ট নষ্ট হওয়া এবং অ্যারোসল দূষণের কারণে সম্ভাব্য ক্ষতি দূর করে।

২। স্পেসিফিকেশন এবং গঠন

৩। সংরক্ষণ এবং শেলফ লাইফ

সংরক্ষণ করুন ঘরের তাপমাত্রায় (৫-৩০৪উপাদানটি এটি ১২ মাস পর্যন্ত স্থিতিশীল থাকেটি ভ্যাকুয়াম প্যাকেট খোলার পরে, অনুগ্রহ করে অব্যবহৃত পণ্যগুলি ডেসিকেটর সহ সরবরাহকৃত পুনরায় সিলযোগ্য প্লাস্টিকের ব্যাগে সংরক্ষণ করুন, এবং অ্যালুমিনিয়াম ফয়েল ব্যাগে। 

সতর্কতা: 

রিএজেন্ট পিল ছোট হয়ে যাওয়া টিউবের মধ্যে আর্দ্রতা প্রবেশ করার ইঙ্গিত এবং রিএজেন্ট আর্দ্র হয়েছে। স্বাভাবিকের চেয়ে উল্লেখযোগ্যভাবে ছোট আকারের যে কোনও রিএজেন্ট ব্যবহার করার আগে ফেলে দেওয়া উচিত বা পজিটিভ কন্ট্রোল দিয়ে পরীক্ষা করা উচিত নমুনা পরীক্ষার জন্য।   

৪। অতিরিক্ত সরঞ্জাম ও রিএজেন্ট প্রয়োজন

১) রিয়েল-টাইম পিসিআর যন্ত্র

পুনরায় জলযোজন করার আগে পজিটিভ কন্ট্রোল ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারেপাইপএটস এবং টিপস

এমনিউক্লিয়েজ-মুক্ত জল

পদক্ষেপনিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন কিট

৫। সামঞ্জস্যপূর্ণ রিয়েল-টাইম পিসিআর সিস্টেম

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600টি

৬। গ্রহণযোগ্য নমুনা

খাদ্য সমৃদ্ধ ব্রোথ, বমি, ডায়রিয়াল নমুনা ইত্যাদি।

৭। অপারেশন পদ্ধতি

১) নিউক্লিক ন্টারপ্রিটেশনসিড ইএক্সট্রাকশন

নমুনা থেকে ডিএনএ একটি উপযুক্ত নিষ্কাশন কিট ব্যবহার করে নিষ্কাশন করুন। সুপারিশ করা হয় যে ডিএনএ প্রায় 100μl এল্যুশন বাফার দিয়ে এলুট করা হয় প্রয়োজনTE বা নিউক্লিয়েজ-মুক্ত H_{কম গতিতে ১৫-২০ সেকেন্ডের জন্য vortex করুন এবং কম গতিতে ১৫-২০ সেকেন্ডের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন। অবিলম্বে ব্যবহার করুন বা সংরক্ষণ করুন}Oউপাদান নিষ্কাশনের চূড়ান্ত ধাপে। বিশুদ্ধ নিউক্লিক অ্যাসিড অবিলম্বে ব্যবহার করা উচিত বা -20°C এ সংরক্ষণ করা উচিত। ব্যবহারের আগে পুনরায় জলযোজন করা উচিত পজিটিভ কন্ট্রোল প্রস্তুতি

পুনরায় জলযোজন করার আগে পজিটিভ কন্ট্রোল ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারে১২ মাস পর্যন্ত

।  এটি ব্যবহারের আগে পুনরায় জলযোজন করা উচিত যোগ করে ২৫০ μl TE বাফার বা nuclease-free H2O, _{কম গতিতে ১৫-২০ সেকেন্ডের জন্য vortex করুন এবং কম গতিতে ১৫-২০ সেকেন্ডের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন। অবিলম্বে ব্যবহার করুন বা সংরক্ষণ করুন} -20°C।৪টি

এমআইএক্স পিপ্রস্তুতিক) ভ্যাকুয়াম প্যাকেটটি খুলুন এবং রিএজেন্টযুক্ত ৮-টিউব স্ট্রিপগুলি বের করুন। টিউবের নীচে পেললেটটি পরীক্ষা করুন

(প্রয়োজন অনুযায়ী টিউবের সংখ্যা কাটুনযদি  প্রয়োজন) । যদি প্রদত্ত টিউবগুলি আপনার যন্ত্রের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ না হয়, তবে রিএজেন্ট পেললেটটি আপনার যন্ত্রের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ একটি অপটিক্যাল টিউবে স্থানান্তর করুন।খ) টিউবগুলি খুলুন এবং ক্যাপ(গুলি) ফেলে দিন (রিয়েল-টাইম পিসিআর মেশিনের জন্য উপযুক্ত নয়), এবং নীচের হিসাবে বরফের উপর বিক্রিয়া মিশ্রণ প্রস্তুত করুন।উপাদানভোল। /পরীক্ষা

ফ্রিজ-শুকনো রিএজেন্ট

ঘ) কম গতিতে ১০~১৫ সেকেন্ডের জন্য টিউবগুলি ঘোরান এবং ২০ সেকেন্ডের জন্য ৩০০০rpm এ সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং সেগুলিকে একটি রিয়েল-টাইম পিসিআর যন্ত্রে রাখুন।

৪) আরটি-পিসিআর সেটআপবিক্রিয়ার পরিমাণ ২৫μl হিসাবে সেট করুন এবং নীচের হিসাবে পিসিআর অ্যামপ্লিফিকেশন পদ্ধতি সেট করুন। 60°C এ FAM

ফ্লুরোসেন্স সংগ্রহ করুন এবং প্যাসিভ রেফারেন্স হিসাবে NONE নির্বাচন করুন।

পদক্ষেপতাপমাত্রা

সময় চক্র

এবং ইন্টারপ্রিটেশন  টেমপ্লেটসিটিব্যাখ্যা